2018年自学考试《细胞生物学》复习笔记3

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第三章  细胞生物学研究方法

本章内容提要：

第1节  细胞形态结构的观察方法

第二节  细胞组分的分析方法

第三节   细胞培养、细胞工程与显微操作技术

第1节  细胞形态结构的观察方法

一、光学显微镜技术

（一）普通光学显微镜

1. 构成：

①照明系统

②光学放大系统

③机械装置

2. 原理：经物镜形成倒立实像，经目镜进一步放大成像。

3. 分辨率：指分辨物体最小间隔的能力。

（二）荧光显微镜 Fluorescence microscope

特点：光源为紫外线，波长较短，分辨力高于普通显微镜；

有两个特殊的滤光片；

照明方式通常为落射式。

用于观察能激发出荧光的结构。用途：免疫荧光观察、基因定位、疾病诊断。

（三）激光共聚焦扫描显微境

Laser confocal scanning microscope, LCSM

用激光作光源，逐点、逐行、逐面快速扫描。

能显示细胞样品的立体结构。

分辨力是普通光学显微镜的3倍。

用途类似荧光显微镜，但能扫描不同层次，形成立体图像。

（四）相差显微镜

把透过标本的可见光的光程差变成振幅差，从而提高了各种结构间的对比度，使各种结构变得清晰可见。在构造上，相差显微镜有不同于普通光学显微镜两个特殊之处。

环形光阑（annular diaphragm）：位于光源与聚光器之间。

相位板（annular phaseplate）：物镜中加了涂有氟化镁的相位板，可将直射光或衍射光的相位推迟1/4λ。

原理

用途：观察未经染色的玻片标本

（五）微分干涉差显微镜 Differential interference contrast microscope （DIC）

1952年，Nomarski发明，利用两组平面偏振光的干涉，加强影像的明暗效果，能显示结构的三维立体投影。标本可略厚一点，折射率差别更大，故影像的立体感更强。

二、电子显微镜

1、电子显微镜的基本知识

电镜与光镜的比较

显微镜  分辨本领       光源         透镜           真空         成像原理

LM    200nm    可见光（400-700）  玻璃透镜   不要求真空    利用样品对光的吸收形成明暗反差和颜色变化

100nm       紫外光（约200nm)    玻璃透镜     不要求真空

TEM   0.1nm   电子束（0.01-0.9）   电磁透镜     要求真空  利用样品对电子的散射和透射形成明暗反差                          2、 原理

以电子束作光源，电磁场作透镜。电子束的波长短，并且波长与加速电压(通常50~120KV)的平方根成反比。

由电子照明系统、电磁透镜成像系统、真空系统、记录系统、电源系统等5部分构成。

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