2019年卫生资格考试检验师考试必读重点2

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免疫印迹法的检测原理

免疫印迹法是在蛋白质电泳分离和抗原抗体检测的基础上发展起来的一项检测蛋白质的技术，它将SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的高分辨力与抗原抗体反应的高特异性相结合。

第1阶段为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)。抗原等蛋白样品经SDS处理后带负电荷，在聚丙烯酰胺凝胶中从阴极向阳极泳动，分子量越小，泳动速度就越快。此阶段分离效果肉眼不可见(只有在染色后才显出电泳区带)。

第二阶段为电转移。此阶段分离的蛋白质条带肉眼仍不可见。

第三阶段为酶免疫定位。将印有蛋白质条带的硝酸纤维素膜(相当于包被了抗原的固相载体)依次与特异性抗体和酶标第二抗体作用后，加入能形成不溶性显色物的酶反应底物，使区带染色。常用的HRP底物为3，3-二氨基联苯胺(呈棕色)和4-氯-1-萘酚(呈蓝紫色)。阳性反应的条带清晰可辨。并可根据SDS-PAGE时加入的分子量标准，确定各组分的分子量。

血浆特异性酶

主要是指在血浆中发挥作用的酶。有少部分酶在细胞合成后分泌到血液中行使其功能，这一类酶具有代表性的就是和凝血过程有关的一系列凝血因子及有关的纤溶因子。它们以酶原状态分泌入血，在一定的条件下被激活，引起相应的生理或病理变化。它们大多数在肝内合成，在血浆中的浓度甚至超过器官细胞内浓度。有的可以作为肝功能试验的一部分。属于这一类性质的酶还有胆碱酯酶、铜氧化酶、脂蛋白脂肪酶等。

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